無論做什么都是熟能生巧,ELISA實驗自然也是如此,其中的操作技術(shù)是需要充分的文字了解與反復(fù)實踐的試劑,良好狀態(tài)的儀器,排除各種影響因素的干擾和正確操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。本文講一講ELISA試劑盒如何鑒定抗體。
1、抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強。
衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應(yīng)率。交叉反應(yīng)率=IC50時抗原濃度(Y)/IC50近似抗原物質(zhì)的濃度(Z)X100%。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
2、抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
3、抗體的親和力鑒定:抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在108~1010/mol,也有多達(dá)1014/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。