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    ELISA實(shí)驗(yàn)失敗的解決方案

    發(fā)布時(shí)間: 2023-05-11  點(diǎn)擊次數(shù): 798次

    1. 試劑盒因素

    試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。

    不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會(huì)導(dǎo)致對樣本的檢測結(jié)果不一致。如:有的廠家酶標(biāo)板孔間CV值大于20%,標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差,使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。

    要注意試劑的批號(hào)和出廠日期,雖然試劑的有效期多為1年,最好選擇剛出廠的試劑盒。

    要注意試劑盒的保存條件,一定要按試劑盒規(guī)定的要求保存。

    要注意實(shí)驗(yàn)的操作要符合試劑盒說明書的規(guī)定,實(shí)驗(yàn)前要詳細(xì)閱讀說明書


    2.標(biāo)本因素和操作因素

    血清是常規(guī)的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:

    ·

    內(nèi)源性物質(zhì)

    ·

    有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

    ·

    外源性物質(zhì)

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       外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

       所以,當(dāng)ELISA測定結(jié)果與預(yù)期或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中不一致時(shí),應(yīng)該首先考慮試劑因素,這個(gè)是做好實(shí)驗(yàn)獲得正確數(shù)據(jù)的前提保證,其次還有標(biāo)本因素和操作因素等多方面進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而為實(shí)驗(yàn)提供正確可靠的檢測結(jié)果。



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