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探討血清進行熱滅活的原因
發(fā)布時間： 2023-02-16 點擊次數(shù)： 739次血清一般具有促進細胞生長代謝、提供各種生長因子、保護培養(yǎng)中的細胞等作用。血清提供基礎營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素等，可以促進細胞生長代謝。提供各種生長因子以及激素，如血小板生長因子、雌二醇等。提供伸展因子及促接觸因子，就可以保護細胞貼壁，減少機械損傷。提供結(jié)合蛋白，可攜帶低分子物質(zhì)，如鐵、激素等，維持細胞代謝。血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長達30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實驗室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，多數(shù)實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負面影響，在我們的技術(shù)專線中常被提到的就是否該對血清進行熱滅活，下面我們就對胎牛血清的熱滅活進行一些探討和解釋。根據(jù)調(diào)查，至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認為是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等.其中*chang用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。有科研人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外，多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進行預熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時，血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù)，自從采用這項技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化，有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4細胞對細胞粘附實驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。
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