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    抗體常見(jiàn)問(wèn)題-南京卡米洛生物工程有限公司

    發(fā)布時(shí)間: 2020-02-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1416次

    問(wèn)題

    原因

    解決方案

    邊緣效應(yīng)

     

    組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中

    APES/多聚賴(lài)氨酸處理玻片;組織切片盡量?。槐M量避免選用壞死較多的組織

    試劑未充分覆蓋組織

    滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

    非特異性染色體

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    抗體質(zhì)量問(wèn)題

    使用質(zhì)量有保證的抗體

    抗體孵育時(shí)間長(zhǎng)

    減少孵育時(shí)間

    抗體濃度過(guò)高

    降低抗體濃度

    一抗為多抗

    使用單克隆抗體

    內(nèi)源性過(guò)氧化物酶及生物素

    延長(zhǎng)滅活時(shí)間

    封閉不足

    延長(zhǎng)封閉時(shí)間

    DAB孵育時(shí)間過(guò)久或濃度過(guò)高

    按說(shuō)明書(shū)配置試劑,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間

    抗體孵育后洗滌不充分

    每次孵育之后洗3*5

    滴加試劑時(shí)干片

    及時(shí)滴加試劑

    切片在緩沖液中浸泡過(guò)久

    抗原修復(fù)之后及時(shí)封閉加一抗,不能過(guò)夜

    陰性結(jié)果

     

     

     

     

     

     

    抗體濃度及質(zhì)量

    選擇有質(zhì)量保證的抗體,先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索抗體使用濃度

    抗原修復(fù)不全

    摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時(shí)間

    抗原豐度

    正常陰性

    封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

    減少封閉時(shí)間

    DAB孵育時(shí)間短

    鏡下控制顯色時(shí)間

    細(xì)胞通透不全,抗體未能進(jìn)入細(xì)胞反應(yīng)

    選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時(shí)間

    一抗二抗不匹配

    選擇正確來(lái)源的二抗

    脫片

     

     

     

     

     

    玻片未處理好

    玻片清洗干凈后用APES或多聚賴(lài)氨酸處理

    切片厚薄不均勻

    更換刀片;調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

    烤片時(shí)間或溫度不夠

    60攝食度2小時(shí)

    組織自身問(wèn)題

    腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片

    抗原修復(fù)時(shí)溫度迅速變化

    抗原修復(fù)后讓其自然冷卻

    操作時(shí)用力過(guò)猛

    有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體

    染色弱

     

     

     

    抗體濃度低,孵育時(shí)間短

    提高抗體濃度,延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間

    試劑使用超過(guò)有效期

    試劑定時(shí)更新

    滴加試劑時(shí)殘余緩沖液過(guò)多使試劑稀釋

    滴加試劑前盡量減少殘余液體

    封閉過(guò)度

    減少封閉時(shí)間

    著色不均勻

     

     

     

    切片厚度不一致

    更換刀片;調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

    試劑配制未混勻使局部濃度不一致

    試劑充分混勻后滴加

    試劑未*覆蓋組織

    滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

    脫蠟不*

    更換脫蠟劑或延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間

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